孔雀石綠(MG)檢測試劑盒（ELISA）

僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

孔雀石綠(MG)檢測試劑盒（ELISA）

說明書

貨號：INS9000002

    使用前，請務(wù)必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術(shù)支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進行實驗。

黃石市艾恩斯生物科技有限公司

網(wǎng)址：www.inselisa.com

電話：0714-6338558

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：孔雀石綠檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Test Kit for  MalachiteGreen oxalate（ELISA）

【包裝規(guī)格】

48T/盒，96T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測各種不同類型樣本中的孔雀石綠（ MalachiteGreen oxalate ，MG）。

【檢驗原理】

  本試劑盒系由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板（固相抗原，貨號：INS9000002C）、辣根酶標(biāo)記物（辣根酶標(biāo)記物，貨號：INS9000002E）、抗體（貨號：INS9000002J）、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測樣本中孔雀石綠。實驗時在酶標(biāo)板中加待檢樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，若樣品中含有孔雀石綠則將與酶標(biāo)板上偶聯(lián)抗原競爭孔雀石綠抗體，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性孔雀石綠含量成負相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中孔雀石綠的殘留量。

【主要組成成分】

主要成分

備注：

1、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液1瓶（高標(biāo)準(zhǔn)液有揮發(fā)性，需注意密封）：10ppb濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

2、標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：0ppb、0.025ppb、0.05ppb、0.1ppb、0.2ppb、0.4ppb

3、 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、離心機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、相關(guān)的樣品配液

7、天平（感量0.01g）

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為28天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】

    樣本類型和處理

本產(chǎn)品涉及的樣本類型較多，在進行樣本處理前要配制相關(guān)液體，且不同樣本處理方法不一，因此不同樣本稀釋倍數(shù)不同檢測下限不同（樣本前處理和樣本處理方法聯(lián)系相關(guān)工作人員索取）。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準(zhǔn)備

1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫2h，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、若標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液未配制好的，則實驗開始前需配制標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液；低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用（配制方法請聯(lián)系相關(guān)工作人員）。

3、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

4、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡兩小時以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

4、加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

6、所有孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記物100μL。

7、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光度值。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.百分吸光率的計算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。

6、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。

2、精密度

批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于15%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于20%。

3、靈敏度

最低檢出劑量小于0.025ppb。

4、回收率

三組已知的高、中、低濃度樣品，進行十次回收率評估，回收率在85%±15%之間。

5、特異性

本試劑盒識別天然和重組孔雀石綠(MG)，與個別結(jié)構(gòu)類似物有25%以內(nèi)的交叉率。

7、穩(wěn)定性

    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本時，每個標(biāo)準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責(zé)任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業(yè)名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司

  生產(chǎn)地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號

  固定電話：0714-6338558

  網(wǎng)    址：www.inselisa.com

  郵    箱：postmaster@inselisa.com

【說明書批準(zhǔn)日期及修改日期】

  批準(zhǔn)日期：2013.05.12

  第一次修改日期：2016.02.16